病理醫(yī)師日常工作中經(jīng)常說的一句話應(yīng)該就是“做個(gè)免疫組化吧”；不管是臨床醫(yī)師，還是患者，他們問的多的問題則是“為什么要做免疫組化？”病理醫(yī)師通過“特殊染色”來進(jìn)行細(xì)胞的識(shí)別。這一做法的依據(jù)是特定細(xì)胞和組織中的成分不同、則化學(xué)性質(zhì)不同，通過染色的方法則可以呈現(xiàn)不同顏色。不過，由于組織固定或儲(chǔ)存等，會(huì)造成相應(yīng)物質(zhì)的活性降低甚至消失，因而限制了特殊染色方法的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)研究的進(jìn)展，根據(jù)抗原與相應(yīng)抗體間特異性結(jié)合的性質(zhì)，則有了現(xiàn)在免疫組化的方法：不同細(xì)胞、不同組織中抗原有一定差異，抗體與被測(cè)組織中的特定抗原結(jié)合，進(jìn)而通過一定顯色方法將結(jié)合的抗體顯示出來。如有相應(yīng)顯色，則證實(shí)可能有被測(cè)抗原；無顯色則可能無被測(cè)抗原。當(dāng)然，這一方法中需注意相應(yīng)的“例外”，如抗體的非特異性結(jié)合、非特異性顯色，則容易造成“假陽性”；或者雖有相關(guān)抗原、但所用抗體與該抗原并未結(jié)合等，則容易造成“假陰性”。隨著免疫組化的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)的增加，這些問題在常規(guī)應(yīng)用中盡量得以避免，前者如各種顯色方法的優(yōu)化；后者如抗原修復(fù)方法的優(yōu)化、新型抗體開發(fā)及選擇。免疫組化檢測(cè)多少錢？甘肅切片免疫組化外包

免疫組化的實(shí)驗(yàn)步驟

免疫組化的實(shí)驗(yàn)步驟通常包括組織固定、切片、抗原修復(fù)、封閉、一抗孵育、二抗孵育、顯色和復(fù)染等。首先，組織樣本需要經(jīng)過固定（如福爾馬林固定）以保持其形態(tài)結(jié)構(gòu)。然后，將固定后的組織包埋在石蠟中并切成薄片?？乖迯?fù)是為了暴露被固定過程掩蓋的抗原表位，常用的方法有熱修復(fù)和酶消化。封閉步驟是為了減少非特異性結(jié)合，通常使用血清或BSA。一抗孵育是關(guān)鍵步驟，一抗與目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合。二抗孵育則是通過二抗與一抗結(jié)合，并連接顯色系統(tǒng)。，通過顯色和復(fù)染使目標(biāo)蛋白可視化。 甘肅切片免疫組化外包有沒有能做免疫組化的實(shí)驗(yàn)外包公司？效果好一點(diǎn)的。

目前幾種常用免疫組化方法簡(jiǎn)單介紹

1）免疫熒光方法是**早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便，所以在臨床病理診斷、檢驗(yàn)中應(yīng)用較廣。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先將已知抗體標(biāo)上熒光素，以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。

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2）免疫酶標(biāo)方法免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后，于60年代發(fā)展起來的技術(shù)。基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前**常用的技術(shù)。本方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是：定位準(zhǔn)確，對(duì)比度好，染色標(biāo)本可長(zhǎng)期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法，且隨著方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測(cè)系統(tǒng)等。

免疫組化在什么情況下進(jìn)行組織抗原修復(fù)，抗原修復(fù)的條件是什么？ 

（1）由于組織中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定過程中，發(fā)生了蛋白之間交聯(lián)及醛基的封閉作用，從而失去抗原性。通過抗原修復(fù)，使得細(xì)胞內(nèi)抗原決定族重新暴露，提高抗原檢測(cè)率。

（2）修復(fù)方法從強(qiáng)到弱一般分為三種，高壓修復(fù)、微波修復(fù)、胰酶修復(fù)。修復(fù)液也分為若干種（具體的可以查閱相關(guān)資料，大量的：中性的、高pH的等）。

（3）微波修復(fù)，我們一般用6min*4次，效果不錯(cuò)。

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做免疫組化時(shí)如何選擇一抗？

1、單克隆和多克隆抗體的選擇。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合，就像導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面，即使是同一個(gè)抗原決定簇，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對(duì)小，檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等避免）。

2、應(yīng)用范圍的選擇。有的一抗只能用于Westernblotting，或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等；甚至標(biāo)明石蠟切片或冰凍切片。

3、種屬反應(yīng)性的選擇（speciesreactivity）。這一點(diǎn)很重要，表明這種抗體可能存在種屬差別，且這種抗體適合檢測(cè)哪種種屬動(dòng)物體內(nèi)的抗原。

4、種屬來源，一般兔來源的多是多克隆抗體；而小鼠來源的多是單克隆抗體，但也有另外。根據(jù)此來源來選擇相應(yīng)的二抗。

5、生產(chǎn)廠家的選擇。

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免疫組化的抗體選擇

抗體是免疫組化實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素之一。選擇合適的一抗需要考慮其特異性、靈敏度和適用性。特異性是指抗體只與目標(biāo)蛋白結(jié)合，而不與其他蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)。靈敏度是指抗體能夠檢測(cè)低豐度的目標(biāo)蛋白。適用性是指抗體適用于免疫組化實(shí)驗(yàn)，而不是其他實(shí)驗(yàn)（如Western blot）。此外，免疫組化實(shí)驗(yàn)中還需要考慮抗體的宿主物種、克隆性和濃度。免疫組化二抗的選擇則需要考慮其與一抗的匹配性，以及是否帶有顯色或熒光標(biāo)記。 甘肅切片免疫組化外包